Ünlü yıldızın annesi Donna Joan Shaffer, babası ise Alan Roger Ackles. Alan Roger da oğlu gibi eski bir aktör. Jensen Ackles’ın bir kız bir de erkek kardeşi var. 28 yaşındaki kız kardeşinin ismi Mackenzie, 38 yaşındaki abisinin ismi ise Joshua

Ackles koyu bir hristiyan ve dini ritüeller konusunda da oldukça hassas.

Başarılı oyuncu ilköğrenimini 1990 yılında Texas’ta bulunan “Formado Pelo Dartmouth” adındaki okulda tamamladı. Liseyi ise iki farklı okulda okuyarak bitirdi. İkisi de Texas’ta bulunan okullar sırasıyla “Formado Graduado Pelo Apollo Junior High School” ve “Formado Pelo LV Berkner High School” şeklindedir.

Bir dönem modellik yapan Ackles, 1997 yılında Formado Pelo LV Berkner High School'dan mezun olduktan sonra "Days of Our Lives" adlı dizide rol aldı. Yıldızın ilk profesyonel oyunculuk deneyimi olan bu dizi kariyeri için kapıları aralayan proje olması bakımından önem taşır.